هوگ و لیفسون[۹۰] (۱۹۵۳) این آزمون را به منظور تشخیص اکسید­کننده­ها از تخمیر کننده­ها معرفی کردند. در این آزمایش از محیط کشت O/F بازال (Difco O/F basal) استفاده شد و pH محیط روی ۱/۷ تنظیم گردید. مقدار ۵ میلی­لیتر از محیط کشت بصورت عمودی به لوله­های استریل با ارتفاع ۱۳ سانتی­متر اضافه شد و در دمای ۱۲۱ درجه سانتی ­گراد به مدت ۲۰ دقیقه اتوکلاو شد. سپس گلوگز ۱۰ درصد تهیه و با فیلترهای سرنگی ۴۵/۰ میکرون (CHROMAFILCA/S) استریل شد. ۵/۰ میلی­لیتر گلوکز استریل به داخل هر لوله حاوی محیط کشت ریخته شد. هر سوش به دو لوله تلقیح و جهت ایجاد محیط غیر­هوازی در یکی از لوله­ها حدود یک سانتی­متر پارافین مایع استریل (اتوکلاو شده در فشار Kg/Cm21 به مدت یک ساعت) روی سطح محیط کشت ریخته شد.
لوله­ها پس از تلقیح در درجه حرارت اتاق نگه­داری شدند. ارزیابی رشد بر اساس تغییر رنگ محیط از سبز به زرد انجام گرفت. ایجاد رنگ زرد فقط در لوله­های بدون پارافین نشان دهنده هوازی اجباری بودن باکتری، تغییر رنگ فقط در لوله­های حاوی پارافین حاکی از بی­هوازی اجباری بودن و تغییر رنگ در هر دو لوله مبین بی­هوازی اختیاری بودن باکتری می­باشد (اسچاد و همکاران، ۲۰۰۱). گاهی باکتری قادر به استفاده از گلوکز به عنوان منبع کربن نیست و به جای آن از پپتون استفاده می­ کند در اینصورت آمونیاک آزاد شده باعث قلیائی شدن محیط می­­گردد و در نتیجه محیط از رنگ سبز به آبی (قلیائی) تغییر رنگ می­دهد (مک­فادین[۹۱]، ۱۹۸۰).
شکل ۶-۳ محیط تخمیری (O/F)

۷-۴-۱۱-۳ تست پکتیناز

این آزمایش برای تعیین فعالیت آنزیم پروتوپکتیناز[۹۲] در باکتری انجام می­گیرد (دای، ۱۹۶۸). ابتدا سطح غده­های سیب زمینی را با آب شستشو داده شد این شستشو برای بر طرف کردن گل و لای موجود در سطح غده سیب­زمینی می­باشد. بعد از خشک شدن سطح سیب­زمینی­ها، برای ضد­عفونی کردن سطح غده سیب­زمینی به الکل ۹۶ درصد آغشته کرده و بر روی چراغ الکلی به مدت ۲۰ ثانیه گرفته شد تا سطح سیب­زمینی با شعله گرفتن ضد­عفونی شود سپس با بهره گرفتن از تیغ استریل شده در وسط غده سیب زمینی یک برش افقی ایجاد گردید به صورتی که غده سیب­زمینی به دو قسمت جدا از هم تقسیم نشود. با لوپ مقداری از کشت ۲۴ ساعت سوش­ها را در وسط قسمت برش خورده سیب­زمینی قرار داده شد بعد از آن دو نیمه برش خورده سیب­زمینی با چسب نواری به هم وصل گردید. سیب زمینی­ها به مدت ۴۸ ساعت در محیط آزمایشگاه نگهداری شده و فعال بودن آنزیم پروتوپکتیناز در باکتری را با له شدن یا له نشدن غده سیب­زمینی­ها ارزیابی گردید.

۸-۴-۱۱-۳ تست آندوسپور

ابتدا سوسپانسیونی از سوش­های مورد نظر و آب مقطر استریل تهیه گردید با بهره گرفتن از لوپ مقداری از سوسپانسیون آماده شده را در یک طرف محیط کشت آگار غذایی به صورت چمنی کشت داده شد سپس بقیه سوسپانسیون را که در میکروتیوپ­های ۵/۱ میلی­لیتری قرار دارد. به مدت ۲۰ دقیقه در آب ۱۰۰ درجه جوشانیده و نیز مقداری از این سوسپانسیون جوشیده شده را با لوپ در طرف دیگر پتری دیشی که سوش مورد نظر در آن کشت شده قرار گرفت. سوش­ها به مدت ۳ روز در دمای ۲۸ درجه در انکوباتور قرار داده شد و ارزیابی اندوسپور بودن باکتری بر اساس رشد کردن یا عدم رشد کردن نمونه کشت شده از سوسپانسیون جوشیده انجام شد.

۱۲-۳ تحلیل آماری

این آزمایش به صورت آشیانه­ای در قالب طرح کاملا تصادفی با عامل­های شهرستان (شوش، دزفول و باوی)، گیاه (جعفری، شوید، گشنیز و هویج)، مزرعه (شاهد، مزرعه آلوده ۱ و مزرعه آلوده ۲) بود که در سه تکرار انجام گردید. آنالیز داده ­ها با کمک نرم افزار SAS و مقایسه میانگین توسط آزمون LSD در سطح ۵ احتمال درصد و نرم افزار MSTAT-C انجام گرفت. از نرم­افزار Excel نیزجهت رسم نمودارها استفاده شد.
فصل چهارم: نتایج و بحث

فصل چهارم: نتایج و بحث

۱-۴ شاخص­ های رشد سبزیجات برگی

۱-۱-۴ ارتفاع گیاه سبزیجات برگی

نتایج تجزیه واریانس تیمار ارتفاع گیاه گشنیز، جعفری و شوید در جدول (۱-۴) آورده شده است. اثر تیمارهای مکان، گیاه، مزرعه و اثر متقابل مکان در مزرعه بر ارتفاع گیاه در سطح آماری ۱ درصد معنی­دار گردید، اما اثر تیمارهای تکرار مکان و اثرات متقابل گیاه در مکان و گیاه در مزرعه بر ارتفاع گیاه در سطح آماری ۵ در­صد معنی­دار شد. همچنین اثر متقابل تیمار گیاه در مزرعه در مکان بر ارتفاع گیاه معنی­دار نبود.
(جدول) ۱-۴ تجزیه واریانس اثر آلودگی نفت سفید بر شاخص­ های رشد ارتفاع گیاه و طول ریشه سبزی­های گشنیز، جعفری و شوید

میانگین مربعات

منابع تغییر

درجه آزادی

ارتفاع گیاه

طول ریشه

مکان

۲

**۶۵/۲۴۷

**۶۹/۱۹۹

تکرارمکان

۶

*۰۸/۲۰

**۷۲/۱

گیاه

۲

**۴۲/۵۱۵

**۰۲/۴۱

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...