۲-۲- منابع گیاهی مورد استفاده

در این پژوهش از اندام‌های مختلف (ساقه و برگ _ دانه) گیاه شوکران باغی و اندام هوایی (ساقه و برگ) گیاه خار عروس استفاده شده است.

۲-۲-۱-‌ جمع آوری وآماده سازی نمونه‌های گیاهی

گیاهان Morina persica L. و Physospermum cornubiense (L.) DC. در ماه‌های خرداد و تیر ۱۳۹۲ از روستای گردبیشه در ارتفاع ۲۲۰۰ متری از سطح دریا از شهرستان بروجن جمع‌ آوری شد و پس از شناسایی جنس وگونه آن توسط گیاه شناس باغ گیاه شناسی کاشان به آزمایشگاه منتقل گردید ودر شرایط مناسب وبه دور از نور خورشید خشک گردیده و آسیاب شد .

۲-۳- جداسازی واستخراج عصاره ازنمونه گیاهی

در این پروژه عمل استخراج به روش سوکسله وبا حلال متانول صورت گرفت که مراحل مختلف کار در ادامه آورده شده است.

۲-۳-۱- عصاره گیری از نمونه های گیاهی

در مورد گیاه خارعروس gr40 از آن توزین شد و با کارتوش به دستگاه سوکسله انتقال ودر محل مخصوص خود (تیمبل) قرار گرفت . عمل عصاره گیری با افزودن ۶۰۰ میلی لیتر حلال متانول به داخل بالن دستگاه سوکسله وپس از اطمینان از برقراری جریان آب سرد در مبرد دستگاه عمل عصاره گیری با دمای ۷۰–۶۰ درجه سانتی گراد آغاز شد وبه مدت ۸ ساعت به طول انجامید . محلول بدست آمده با تبخیرکن دوار در دمای ۵۰ درجه سانتی گراد وفشار کاهش یافته، تغلیظ گردید تا به حجم ۵-۴ میلی لیتر برسد . عصاره تغلیظ شده برای خشک شدن کامل به پتری‌دیش منتقل و ابتدا درآون معمولی در دمای ۵۰ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴ ساعت نگهداری شدتا بقیه حلال تبخیر شود و سپس به آون خلأ برای حذف باقی مانده مواد فرار موجود درعصاره انتقال داده شد. عصاره‌های متانولی حاصل از گیاه با اسپاتول تراشیده و به ظروف در‌پوش‌دار و غیر قابل نفوذ منتقل گردید و به منظور جلوگیری از تجزیه و یا از بین رفتن مواد موثر موجود در عصاره‌ها تا انجام آزمایش های بعدی در یخچال نگه‌داری شد.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

عصاره بدست آمده از دانه های گیاه شوکران باغی را در ۱۵۰ میلی لیتر آب حل کرده و ۳ بار با ۵۰ میلی لیتر هگزان توسط قیف دکانتور استخراج کرده تا روغن و چربی وارد فاز هگزانی شود وعمل حلال زدایی را مانند قسمت بالا انجام داده در یخچال نگهداری می کنیم.

۲-۳-۲- تعیین بازده عصاره‌گیری

با بهره گرفتن از وزن گیاه خشک مورد استفاده در عصاره گیری و وزن عصاره بدست آمده بازده عصاره به صورت نسبت وزنی/ وزنی w/w ) (محاسبه شد که حاصل‌ضرب این نسبت در ۱۰۰ راندمان عصاره‌گیری رابرحسب درصد مشخص می کند.

۲-۴- استخراج ترکیبات فرار گیاهی

برای استخراج ترکیبات فرار بخش‌های مختلف گیاه، از روش تقطیر واستخراج همزمان و از دستگاه SDE استفاده شد. ۲۰۰ گرم از گیاه خشک آسیاب شده را پس ازتوزین به بالن ۲ لیتری منتقل شد و برروی آن آنقدرآب اضافه شد که مجموع نمونه گیاهی وآب حدود حجم بالن را اشغال نماید . حدود ۳۵ میلی لیتر پنتان دربالن ۱۰۰ میلی لیتری دستگاه ریخته وبالن‌ها رادرون شوف بالن (منتل) قرارداده ودستگاه اسانس‌گیری راه اندازی شد . پس از برقراری جریان آب سرد درمبرد دستگاه و تنظیم درجه حرارت بالن‌ها عمل اسانس گیری به مدت ۲ ساعت ادامه یافت. پس از اتمام عمل استخراج مقداری سدیم سولفات بدون آب درون اسانس همراه با پنتان برای جذب آب احتمالی موجود در آن اضافه شد، سپس اسانس حاصل به مدت ۲۴ ساعت درون یخچال قرار دادهوپس از مدت حدوداً ۲۴ ساعت درون ویال تیره رنگی سرریز شد و به منظور تغلیظ اسانس و تبخیر حلال ساعاتی در دمای آزمایشگاه قرار داده شد و در دمای ۴+ درجه سانتی گراد برای تزریق به دستگاه GC نگهداری شدند. در ضمن از تفاضل وزن ویال پس از جمع آوری اسانس درآن و قبل از آن، وزن خالص ترکیبات فرار محاسبه گردید.
۲۲

۲-۴-۱- تعیین بازده اسانس‌گیری

با بهره گرفتن از وزن گیاه خشک مورد استفاده در اسانس گیری و وزن اسانس بدست آمده بازده اسانس به صورت نسبت وزنی/وزنی (w/w) محاسبه شد که حاصل ضرب این نسبت در ۱۰۰، بازده اسانس گیری را برحسب درصد مشخص می کند.

۲-۴-۲- شناسایی ترکیب‌های فرار گیاه با دستگاه GC-MS

نمونههای ترکیبات فرار گیاهی با دستگاه GC/MS حاوی ستون HP- 5MS (طول ۳۰ متر، قطر داخلی ۲۵/۰ میلیمتر، ضخامت لایه ساکن ۲۵/۰ میکرومتر) و گاز حامل هلیم با درجه خلوص ۹۹۹۹۹/۹۹ آنالیز شدند. در ضمن سرعت جریان گاز حامل ۵/۱ میلی‌لیتر بر دقیقه و انرژی یونیزاسیون در طیفسنج جرمی ۷۰ الکترون ولت انتخاب گردید. برنامه دمایی دستگاه به این صورت تنظیم گردید: ابتدا دما به مدت ۲ دقیقه در ۶۰ درجه سانتیگراد نگه داشته شد، سپس به دمای ۲۴۶ سانتیگراد با سرعت ۳ درجه بر دقیقه افزایش یافت، و به مدت ۲ دقیقه دراین دما باقی ماند، سپس به دمای ۲۸۰ سانتیگراد افزایش یافته و به مدت ۱۰ دقیقه در این دما باقی ماند .
برای شناسایی ترکیبهای فرار گیاه، مراحل زیر انجام گرفت.
الف) با توجه به پیشنهادهایی که کتابخانه دستگاه GC-MS ارائه داد؛ هر یک از آنها جداگانه مورد بررسی قرار گرفت.
ب) طیف‌های جرمی به دست آمده با طیف‌های موجود در کتاب Adams مقایسه گردید [۵۰].
ج) با توجه به زمان بازداری هر پیک، ضریب بازداری کواتس KI ) (هر یک از طریق معادله مربوط به محاسبه ضریب کواتس به دست آمد و با ضریب کواتس موجود در منابع (کتاب Adams و سایت NIST) در شرایط مشابه مقایسه گردید.

۲-۵- بررسی فعالیت ضد اکسیدانی

۲-۵-۱- بررسی فعالیت ضد اکسیدانی به روش DPPH

در این پروژه خاصیت ضد اکسیدانی عصاره اندام‌های مختلف گیاهان Morina persica L. و Physospermum cornubiense (L.) DC. از طریق اندازه گیری ظرفیت کاهش رادیکال DPPH (2، ۲- دی فنیل-۱-پیکریل هیدرازیل) مورد بررسی قرار گرفت. دراین ارزیابی توانایی عصاره گیاهی (به عنوان ضد اکسیدان) در دادن الکترون به رادیکال DPPH مورد سنجش قرار گرفت.
تهیه محلول‌ها
محلول DPPH : میزان ۷/۴ میلی گرم از DPPH با ترازوی آنالیتیکی به طور دقیق وزن ودربالن ژوژه ۵۰ میلی لیتری تیره رنگ بامتانول به حجم رسید . محلول بدست آمده رنگ ارغوانی داشت.
محلول شاهد : میزان ۱ میلی‌لیتر از متانول که به آن ۱ میلی لیتر از محلول DPPH اضافه شد. (جذب آن باید در بازه ۷/۱-۱/۱باشد.)
الف) نمونه استانداردBHT

موضوعات: بدون موضوع لینک ثابت

فرم در حال بارگذاری ...

فید نظر برای این مطلب